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多肽分子量检测方法
 
1、方法:高效液相色谱法。
2、仪器:高效液相色谱仪。
3、试剂:三氟乙酸,乙腈。标准品:核糖核酸酶A(分子量13700),胰岛素(分子量5808),胸腺肽a(分子量3108),生长激素抑制因子(分子量1521)。(中国生物制品检定所购买上述标准品。)
4、样品处理:取充分研磨的供试品适量,加流动相制成每1ml中含多肽1mg的溶液,备用。
5、色谱条件与系统适应性实验:用凝胶色谱柱(如TSK.GEL.2000SW×17.8mm×300mm5um)以三氟乙酸-乙腈-水(0.051090)为流动相;流速为每分钟0.7ml;检测波长为214nm,理论塔板数按核糖核酸酶A峰计算不得低于5000,分离度以相邻峰高与峰谷之比计算不得小于3.0.
6、标准曲线的制备:分别取核糖核酸酶A,胰岛素,胸腺肽a,生长激素抑制因子适量,用流动相制成每1ml中各含1mg的溶液,作为分子量标准溶液。分别取分子量标准溶液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,重复进样,其保留时间偏差不得大于2.0%。以各峰的保留时间为横坐标,分子量对数为纵坐标,做标准曲线,进行线性回归,相关系数不得小于0.99.
7、测定法:取供试品溶液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按面积归一化法计算。
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